Perle magnetiche Mag Oligo dT per l'estrazione di mRNA e purificazione di mRNA, elevata purezza

Estrazione di mRNA con Mag Oligo dT, Purificazione di mRNA

BreveIntroduzione

Le microsfere magnetiche Oligo dT sono microsfere magnetiche rivestite covalentemente con filamenti di oligodeossitimidina sulla loro superficie. Il loro principio fondamentale utilizza la regola di appaiamento complementare delle basi, dove i filamenti Oligo dT si ibridano e si legano specificamente alla coda poliA, una caratteristica distintiva all'estremità 3' dell'RNA messaggero eucariotico (mRNA), consentendo la separazione rapida e ad alta purezza dell'mRNA dall'RNA totale.

In poche parole, le microsfere magnetiche Oligo dT agiscono come un "pettine magnetico specializzato", "estraendo" con precisione l'mRNA con una coda poliA dalla miscela di RNA.

Caratteristiche del prodotto

Elevata specificità: Si lega specificamente all'RNA con una coda poliA, principalmente mRNA, rimuovendo efficacemente le interferenze da rRNA e tRNA (che costituiscono oltre il 95% dell'RNA totale).

Elevata purezza e integrità: Reazioni chimiche delicate e metodi di lavaggio non alcolici preservano meglio l'integrità e la purezza dell'mRNA, rendendolo adatto per applicazioni a valle che richiedono una qualità dell'RNA estremamente elevata.

Funzionamento rapido e semplice: L'intero processo può essere completato in 30-60 minuti, significativamente più velocemente del tradizionale metodo di cromatografia su colonna di cellulosa oligo dT e non richiede centrifugazione.

Compatibilità ad alto rendimento: Facilmente automatizzato, compatibile con formati a 96 pozzetti, soddisfacendo le esigenze di applicazioni ad alto rendimento come il sequenziamento.

Elevata sensibilità: Adatto per l'isolamento di mRNA da campioni in tracce (ad esempio, un piccolo numero di cellule, campioni microdissezionati con cattura laser, sezioni FFPE).

Sicuro ed ecologico: Evita l'uso di reagenti tossici come fenolo e cloroformio.

Principali campi di applicazione

Le microsfere magnetiche Oligo dT sono uno strumento essenziale in quasi tutti i campi che coinvolgono la ricerca sull'mRNA.

Sequenziamento di nuova generazione (NGS)

RNA-Seq: Questa è l'applicazione più importante. L'arricchimento dell'mRNA utilizzando microsfere magnetiche Oligo dT per la costruzione di librerie di sequenziamento consente l'analisi dei livelli di espressione genica, la scoperta di nuovi trascritti e l'individuazione di splicing alternativi. Per gli eucarioti, questo è il metodo più comune per la preparazione di librerie di mRNA.

Sequenziamento dell'RNA a singola cellula (scRNA-seq): A livello di singola cellula, le microsfere magnetiche Oligo dT sono fondamentali per la cattura dell'mRNA rilasciato dopo la lisi cellulare.

Costruzione e clonaggio di librerie di cDNA

L'mRNA purificato funge da modello per la sintesi del primo filamento di cDNA, utilizzato per la costruzione di librerie di cDNA, il clonaggio genico e studi funzionali.

Analisi dell'espressione genica

RT-qPCR: L'arricchimento dell'mRNA seguito da trascrizione inversa e PCR quantitativa produce dati di espressione genica più accurati e sensibili rimuovendo il rumore di fondo non mRNA.

Northern Blot: Richiede mRNA ad alta purezza come molecola bersaglio per il probing.

Traduzione in vitro

Utilizzato in sistemi di espressione proteica senza cellule, dove l'mRNA purificato funge direttamente da modello per la sintesi della proteina bersaglio.

Ricerca e diagnosi di malattie

Scoperta di biomarcatori: Isolamento dell'mRNA da campioni clinici (ad esempio, sangue, tessuto tumorale) per la ricerca di firme di espressione genica associate alla malattia.

Rilevamento di agenti patogeni: Anche alcuni RNA virali possiedono code poliA e possono essere arricchiti utilizzando microsfere magnetiche Oligo dT per il rilevamento.

Informazioni tecniche

Riepilogo

Le microsfere magnetiche Oligo dT sono uno strumento efficiente e affidabile per la purificazione dell'mRNA. Rinomate per la loro eccezionale specificità, il funzionamento semplice e veloce e l'eccellente compatibilità, sono diventate un componente indispensabile nella moderna biologia molecolare, genomica e ricerca trascrittomica, in particolare nel sequenziamento dell'RNA ad alto rendimento. La loro importanza diventerà ancora più evidente con il progresso della medicina di precisione e delle tecnologie a singola cellula.