Billes magnétiques Mag Oligo dT pour l'extraction d'ARNm, purification d'ARNm, billes magnétiques, haute pureté

Extraction d'ARNm avec billes magnétiques Oligo dT Purification d'ARNm

BrefIntroduction

Les billes magnétiques Oligo dT sont des microsphères magnétiques recouvertes de brins d'oligodésoxythymidine à leur surface. Leur principe de base utilise la règle d'appariement complémentaire des bases, où les brins Oligo dT s'hybrident et se lient spécifiquement à la queue PolyA, une caractéristique à l'extrémité 3' de l'ARN messager eucaryote (ARNm), permettant la séparation rapide et de haute pureté de l'ARNm à partir de l'ARN total.

En termes simples, les billes magnétiques Oligo dT agissent comme un "peigne magnétique spécialisé", "extrayant" précisément l'ARNm avec une queue PolyA du mélange d'ARN.

Caractéristiques du produit

Haute spécificité : Se lie spécifiquement à l'ARN avec une queue PolyA, principalement l'ARNm, éliminant efficacement l'interférence de l'ARNr et de l'ARNt (qui constituent plus de 95 % de l'ARN total).

Haute pureté et intégrité : Les réactions chimiques douces et les méthodes de lavage non alcoolisées préservent mieux l'intégrité et la pureté de l'ARNm, ce qui le rend adapté aux applications en aval nécessitant une qualité d'ARN extrêmement élevée.

Fonctionnement rapide et simple : L'ensemble du processus peut être réalisé en 30 à 60 minutes, ce qui est nettement plus rapide que la méthode traditionnelle de chromatographie sur colonne de cellulose oligo dT et ne nécessite aucune centrifugation.

Compatibilité haut débit : Facilement automatisé, compatible avec les formats de plaques à 96 puits, répondant aux exigences des applications à haut débit telles que le séquençage.

Haute sensibilité : Convient à l'isolement de l'ARNm à partir d'échantillons traces (par exemple, un petit nombre de cellules, des échantillons microdissequés par capture laser, des coupes FFPE).

Sûr et respectueux de l'environnement : Évite l'utilisation de réactifs toxiques comme le phénol et le chloroforme.

Principaux domaines d'application

Les billes magnétiques Oligo dT sont un outil essentiel dans presque tous les domaines impliquant la recherche sur l'ARNm.

Séquençage de nouvelle génération (NGS)

RNA-Seq : Il s'agit de l'application la plus essentielle. L'enrichissement de l'ARNm à l'aide de billes magnétiques Oligo dT pour la construction de bibliothèques de séquençage permet d'analyser les niveaux d'expression des gènes, de découvrir de nouveaux transcrits et de détecter l'épissage alternatif. Pour les eucaryotes, il s'agit de la méthode la plus courante pour la préparation des bibliothèques d'ARNm.

Séquençage de l'ARN à cellule unique (scRNA-seq) : Au niveau de la cellule unique, les billes magnétiques Oligo dT sont essentielles pour capturer l'ARNm libéré après la lyse cellulaire.

Construction et clonage de bibliothèques d'ADNc

L'ARNm purifié sert de matrice pour la synthèse du premier brin d'ADNc, utilisé pour la construction de bibliothèques d'ADNc, le clonage de gènes et les études fonctionnelles.

Analyse de l'expression des gènes

RT-qPCR : L'enrichissement de l'ARNm suivi d'une transcription inverse et d'une PCR quantitative donne des données d'expression des gènes plus précises et plus sensibles en supprimant le bruit de fond non-ARNm.

Northern Blot : Nécessite de l'ARNm de haute pureté comme molécule cible pour le sondage.

Traduction in vitro

Utilisé dans les systèmes d'expression de protéines sans cellules, où l'ARNm purifié sert directement de matrice pour la synthèse de la protéine cible.

Recherche et diagnostic des maladies

Découverte de biomarqueurs : Isolement de l'ARNm à partir d'échantillons cliniques (par exemple, sang, tissu tumoral) pour rechercher des signatures d'expression génique associées à la maladie.

Détection des agents pathogènes : Certains ARN viraux possèdent également des queues PolyA et peuvent être enrichis à l'aide de billes magnétiques Oligo dT pour la détection.

Informations techniques

Résumé

Les billes magnétiques Oligo dT sont un outil efficace et fiable pour la purification de l'ARNm. Réputées pour leur spécificité exceptionnelle, leur fonctionnement simple et rapide et leur excellente compatibilité, elles sont devenues un composant indispensable de la biologie moléculaire, de la génomique et de la recherche en transcriptomique modernes, en particulier dans le séquençage de l'ARN à haut débit. Leur importance deviendra encore plus importante avec les progrès de la médecine de précision et des technologies à cellule unique.