Manik-manik Magnetik Mag Oligo DT Ekstraksi mRNA Pemurnian mRNA Manik-manik Magnetik Kemurnian Tinggi

Ekstraksi mRNA Oligo dT Mag, Pemurnian mRNA

SingkatPendahuluan

Manik-manik magnetik Oligo dT adalah mikrosfer magnetik yang dilapisi secara kovalen dengan untaian oligodeoksitimina pada permukaannya. Prinsip utamanya memanfaatkan aturan pasangan komplementer basa, di mana untaian Oligo dT secara khusus berhibridisasi dan mengikat ekor PolyA, fitur karakteristik pada ujung 3' dari messenger RNA (mRNA) eukariotik, yang memungkinkan pemisahan mRNA dari total RNA dengan cepat dan kemurnian tinggi.

Sederhananya, manik-manik magnetik Oligo dT bertindak seperti "sisir magnetik khusus," yang secara tepat "mengekstraksi" mRNA dengan ekor PolyA dari campuran RNA.

Fitur Produk

Spesifisitas Tinggi: Secara khusus mengikat RNA dengan ekor PolyA, terutama mRNA, secara efektif menghilangkan gangguan dari rRNA dan tRNA (yang merupakan lebih dari 95% dari total RNA).

Kemurnian dan Integritas Tinggi: Reaksi kimia yang lembut dan metode pencucian non-alkohol lebih baik menjaga integritas dan kemurnian mRNA, sehingga cocok untuk aplikasi hilir yang membutuhkan kualitas RNA yang sangat tinggi.

Operasi Cepat dan Sederhana: Seluruh proses dapat diselesaikan dalam waktu 30-60 menit, jauh lebih cepat daripada metode kromatografi kolom selulosa oligo dT tradisional, dan tidak memerlukan sentrifugasi.

Kompatibilitas Throughput Tinggi: Mudah diotomatisasi, kompatibel dengan format pelat 96-sumur, memenuhi tuntutan aplikasi throughput tinggi seperti pengurutan.

Sensitivitas Tinggi: Cocok untuk isolasi mRNA dari sampel jejak (misalnya, sejumlah kecil sel, sampel yang dipotong mikro dengan penangkapan laser, bagian FFPE).

Aman dan Ramah Lingkungan: Menghindari penggunaan reagen beracun seperti fenol dan kloroform.

Bidang Aplikasi Utama

Manik-manik magnetik Oligo dT adalah alat penting di hampir semua bidang yang melibatkan penelitian mRNA.

Pengurutan Generasi Berikutnya (NGS)

RNA-Seq: Ini adalah aplikasi yang paling inti. Memperkaya mRNA menggunakan manik-manik magnetik Oligo dT untuk konstruksi pustaka pengurutan memungkinkan analisis tingkat ekspresi gen, penemuan transkrip baru, dan deteksi splicing alternatif. Untuk eukariota, ini adalah metode yang paling umum untuk persiapan pustaka mRNA.

Pengurutan RNA Sel Tunggal (scRNA-seq): Pada tingkat sel tunggal, manik-manik magnetik Oligo dT adalah kunci untuk menangkap mRNA yang dilepaskan setelah lisis sel.

Konstruksi dan Kloning Pustaka cDNA

mRNA yang dimurnikan berfungsi sebagai templat untuk mensintesis untai pertama cDNA, yang digunakan untuk membangun pustaka cDNA, kloning gen, dan studi fungsional.

Analisis Ekspresi Gen

RT-qPCR: Memperkaya mRNA diikuti oleh transkripsi balik dan PCR kuantitatif menghasilkan data ekspresi gen yang lebih akurat dan sensitif dengan menghilangkan kebisingan latar belakang non-mRNA.

Northern Blot: Membutuhkan mRNA kemurnian tinggi sebagai molekul target untuk probing.

Translasi In Vitro

Digunakan dalam sistem ekspresi protein bebas sel, di mana mRNA yang dimurnikan secara langsung berfungsi sebagai templat untuk mensintesis protein target.

Penelitian dan Diagnosis Penyakit

Penemuan Biomarker: Mengisolasi mRNA dari sampel klinis (misalnya, darah, jaringan tumor) untuk mencari tanda tangan ekspresi gen yang terkait dengan penyakit.

Deteksi Patogen: RNA virus tertentu juga memiliki ekor PolyA dan dapat diperkaya menggunakan manik-manik magnetik Oligo dT untuk deteksi.

Info Teknis

Ringkasan

Manik-manik magnetik Oligo dT adalah alat yang efisien dan andal untuk pemurnian mRNA. Terkenal karena spesifisitasnya yang luar biasa, operasi yang sederhana dan cepat, serta kompatibilitas yang sangat baik, mereka telah menjadi komponen yang sangat diperlukan dalam biologi molekuler modern, genomik, dan penelitian transkriptomik, khususnya dalam pengurutan RNA throughput tinggi. Pentingnya mereka akan menjadi lebih menonjol dengan kemajuan pengobatan presisi dan teknologi sel tunggal.