Mag Oligo dT Manyetik Boncuklar mRNA Ekstraksiyonu mRNA Saflaştırma Manyetik Boncuklar Yüksek Saflık

Mag Oligo dT mRNA Ekstraksiyonu mRNA Saflaştırma

ÖzetGiriş

Oligo dT manyetik boncuklar, yüzeylerinde oligodeoksitimin dizileri ile kovalent olarak kaplanmış manyetik mikrosferlerdir. Temel prensipleri, baz tamamlayıcılık eşleşme kuralınıkullanır; burada Oligo dT dizileri, ökaryotik haberci RNA'nın (mRNA) 3' ucunda bulunan karakteristik bir özellik olan PolyA kuyruğunaözellikle hibridize olur ve bağlanır, bu da toplam RNA'dan mRNA'nın hızlı ve yüksek saflıkta ayrılmasını sağlar.

Basitçe söylemek gerekirse, Oligo dT manyetik boncuklar, RNA karışımından PolyA kuyruğu olan mRNA'yı hassas bir şekilde "ekstre eden" bir "uzman manyetik tarak" gibi davranır.

Ürün Özellikleri

Yüksek Özgüllük: Özellikle PolyA kuyruğu olan RNA'ya, öncelikle mRNA'ya bağlanır, rRNA ve tRNA'dan (toplam RNA'nın %95'inden fazlasını oluşturur) gelen paraziti etkili bir şekilde ortadan kaldırır.

Yüksek Saflık ve Bütünlük: Nazik kimyasal reaksiyonlar ve alkolsüz yıkama yöntemleri, mRNA'nın bütünlüğünü ve saflığını daha iyi koruyarak, son derece yüksek RNA kalitesi gerektiren sonraki uygulamalar için uygun hale getirir.

Hızlı ve Basit İşlem: Tüm süreç 30-60 dakika içinde tamamlanabilir, geleneksel oligo dT selüloz kolon kromatografi yönteminden önemli ölçüde daha hızlıdır ve santrifüjleme gerektirmez.

Yüksek Verim Uyumluluğu: Kolayca otomatikleştirilebilir, 96 kuyucuklu plaka formatlarıyla uyumludur, dizileme gibi yüksek verimli uygulamaların taleplerini karşılar.

Yüksek Hassasiyet: İz örneklerinden (örneğin, az sayıda hücre, lazer yakalama mikrodiseksiyon örnekleri, FFPE kesitleri) mRNA izolasyonu için uygundur.

Güvenli ve Çevre Dostu: Fenol ve kloroform gibi toksik reaktiflerin kullanımından kaçınılır.

Ana Uygulama Alanları

Oligo dT manyetik boncuklar, mRNA araştırması içeren neredeyse tüm alanlarda temel bir araçtır.

Yeni Nesil Dizileme (NGS)

RNA-Seq: Bu, en temel uygulamadır. Dizileme kütüphanesi oluşturmak için Oligo dT manyetik boncuklar kullanılarak mRNA'nın zenginleştirilmesi, gen ekspresyon seviyelerinin analizi, yeni transkriptlerin keşfi ve alternatif eklenmenin tespiti sağlar. Ökaryotlar için bu, mRNA kütüphanesi hazırlığı için en yaygın yöntemdir.

Tek Hücre RNA Dizileme (scRNA-seq): Tek hücre seviyesinde, Oligo dT manyetik boncuklar, hücre lizisinden sonra salınan mRNA'yı yakalamak için anahtardır.

cDNA Kütüphanesi Oluşturma ve Klonlama

Saflaştırılmış mRNA, cDNA kütüphaneleri, gen klonlama ve fonksiyonel çalışmalar oluşturmak için kullanılan ilk cDNA ipliğinin sentezi için şablon görevi görür.

Gen İfade Analizi

RT-qPCR: mRNA'nın zenginleştirilmesi, ardından ters transkripsiyon ve kantitatif PCR, mRNA olmayan arka plan gürültüsünü ortadan kaldırarak daha doğru ve hassas gen ekspresyon verileri sağlar.

Northern Blot: Prob için hedef molekül olarak yüksek saflıkta mRNA gerektirir.

İn Vitro Çeviri

Saflaştırılmış mRNA'nın hedef proteini sentezlemek için doğrudan şablon olarak kullanıldığı hücre içermeyen protein ekspresyon sistemlerinde kullanılır.

Hastalık Araştırması ve Teşhisi

Biyobelirteç Keşfi: Hastalıkla ilişkili gen ekspresyon imzalarını aramak için klinik örneklerden (örneğin, kan, tümör dokusu) mRNA'nın izole edilmesi.

Patojen Tespiti: Bazı viral RNA'lar da PolyA kuyruklarına sahiptir ve tespit için Oligo dT manyetik boncuklar kullanılarak zenginleştirilebilir.

Teknik Bilgiler

Oligo dT manyetik boncuklar, mRNA saflaştırması için verimli ve güvenilir bir araçtır. Olağanüstü özgüllükleri, basit ve hızlı işlemleri ve mükemmel uyumlulukları ile tanınan bu boncuklar, özellikle yüksek verimli RNA dizilemede, modern moleküler biyoloji, genomik ve transkriptomik araştırmalarında vazgeçilmez bir bileşen haline gelmiştir. Önemi, hassas tıp ve tek hücre teknolojilerinin ilerlemesiyle daha da belirginleşecektir.