ลูกปัดแม่เหล็ก Mag Oligo DT สำหรับสกัด mRNA และทำความสะอาด mRNA คุณภาพสูง

การสกัด mRNA ด้วย Mag Oligo dT และการทำให้บริสุทธิ์ mRNA

บทสรุปบทนำ

ลูกปัดแม่เหล็ก Oligo dT คือไมโครสเฟียร์แม่เหล็กที่เคลือบด้วยสาย oligodeoxythymine บนพื้นผิว หลักการทำงานหลักคือใช้ กฎการจับคู่เบส โดยที่สาย Oligo dT จะจับและรวมตัวกับ PolyA tail ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะที่ปลาย 3' ของ messenger RNA (mRNA) ของยูคาริโอต ทำให้สามารถแยก mRNA ออกจาก total RNA ได้อย่างรวดเร็วและมีความบริสุทธิ์สูง

กล่าวโดยสรุป ลูกปัดแม่เหล็ก Oligo dT ทำหน้าที่เหมือน "หวีแม่เหล็กพิเศษ" ที่ "สกัด" mRNA ที่มี PolyA tail ออกจากส่วนผสมของ RNA ได้อย่างแม่นยำ

คุณสมบัติของผลิตภัณฑ์

ความจำเพาะสูง: จับกับ RNA ที่มี PolyA tail โดยเฉพาะ ซึ่งส่วนใหญ่เป็น mRNA กำจัดสิ่งรบกวนจาก rRNA และ tRNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพ (ซึ่งคิดเป็นมากกว่า 95% ของ total RNA)

ความบริสุทธิ์และความสมบูรณ์สูง: ปฏิกิริยาทางเคมีที่ไม่รุนแรงและวิธีการล้างแบบไม่ใช้แอลกอฮอล์ช่วยรักษาความสมบูรณ์และความบริสุทธิ์ของ mRNA ได้ดีกว่า ทำให้เหมาะสำหรับการใช้งานในขั้นตอนต่อไปที่ต้องการคุณภาพ RNA ที่สูงมาก

การใช้งานที่รวดเร็วและง่ายดาย: กระบวนการทั้งหมดสามารถทำได้ภายใน 30-60 นาที ซึ่งเร็วกว่าวิธีการโครมาโทกราฟีคอลัมน์เซลลูโลส oligo dT แบบดั้งเดิมอย่างมาก และไม่จำเป็นต้องใช้การหมุนเหวี่ยง

ความเข้ากันได้กับปริมาณงานสูง: ทำงานอัตโนมัติได้ง่าย เข้ากันได้กับรูปแบบ 96-well plate ตอบสนองความต้องการของการใช้งานปริมาณงานสูง เช่น การหาลำดับเบส

ความไวสูง: เหมาะสำหรับการแยก mRNA จากตัวอย่างขนาดเล็ก (เช่น เซลล์จำนวนน้อย ตัวอย่างที่ถูกตัดด้วยเลเซอร์ไมโครดิสเซกชัน ส่วน FFPE)

ปลอดภัยและเป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อม: หลีกเลี่ยงการใช้สารเคมีที่เป็นพิษ เช่น ฟีนอลและคลอโรฟอร์ม

สาขาการใช้งานหลัก

ลูกปัดแม่เหล็ก Oligo dT เป็นเครื่องมือสำคัญในเกือบทุกสาขาที่เกี่ยวข้องกับการวิจัย mRNA

การหาลำดับเบสรุ่นต่อไป (NGS)

RNA-Seq: นี่คือการประยุกต์ใช้งานหลัก การเพิ่มความเข้มข้นของ mRNA โดยใช้ลูกปัดแม่เหล็ก Oligo dT สำหรับการสร้างไลบรารีการหาลำดับเบสช่วยให้สามารถวิเคราะห์ระดับการแสดงออกของยีน ค้นพบทรานสคริปต์ใหม่ และตรวจจับการสลับแบบต่างๆ สำหรับยูคาริโอต นี่เป็นวิธีการเตรียมไลบรารี mRNA ที่พบได้บ่อยที่สุด

การหาลำดับเบส RNA ของเซลล์เดียว (scRNA-seq): ในระดับเซลล์เดียว ลูกปัดแม่เหล็ก Oligo dT เป็นกุญแจสำคัญในการจับ mRNA ที่ปล่อยออกมาหลังจากการสลายเซลล์

การสร้างและโคลนไลบรารี cDNA

mRNA ที่บริสุทธิ์ทำหน้าที่เป็นแม่แบบสำหรับการสังเคราะห์สายแรกของ cDNA ซึ่งใช้สำหรับการสร้างไลบรารี cDNA การโคลนยีน และการศึกษาการทำงาน

การวิเคราะห์การแสดงออกของยีน

RT-qPCR: การเพิ่มความเข้มข้นของ mRNA ตามด้วยการถอดรหัสย้อนกลับและ PCR เชิงปริมาณให้ข้อมูลการแสดงออกของยีนที่แม่นยำและละเอียดอ่อนยิ่งขึ้นโดยการกำจัดสัญญาณรบกวนที่ไม่ใช่ mRNA

Northern Blot: ต้องการ mRNA ที่มีความบริสุทธิ์สูงเป็นโมเลกุลเป้าหมายสำหรับการตรวจสอบ

การแปลในหลอดทดลอง

ใช้ในระบบการแสดงออกของโปรตีนแบบไร้เซลล์ ซึ่ง mRNA ที่บริสุทธิ์ทำหน้าที่โดยตรงเป็นแม่แบบสำหรับการสังเคราะห์โปรตีนเป้าหมาย

การวิจัยและการวินิจฉัยโรค

การค้นพบไบโอมาร์กเกอร์: การแยก mRNA จากตัวอย่างทางคลินิก (เช่น เลือด เนื้อเยื่อเนื้องอก) เพื่อค้นหาลักษณะเฉพาะของการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับโรค

การตรวจจับเชื้อโรค: RNA ของไวรัสบางชนิดยังมี PolyA tail และสามารถเพิ่มความเข้มข้นได้โดยใช้ลูกปัดแม่เหล็ก Oligo dT เพื่อการตรวจจับ

ข้อมูลทางเทคนิค

ลูกปัดแม่เหล็ก Oligo dT เป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพและเชื่อถือได้สำหรับการทำให้ mRNA บริสุทธิ์ โดดเด่นด้วยความจำเพาะที่ยอดเยี่ยม การใช้งานที่ง่ายและรวดเร็ว และความเข้ากันได้ที่ดีเยี่ยม ทำให้เป็นส่วนประกอบที่ขาดไม่ได้ในการวิจัยชีววิทยาระดับโมเลกุล พันธุศาสตร์ และการถอดรหัสสมัยใหม่ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการหาลำดับเบส RNA ปริมาณงานสูง ความสำคัญของมันจะยิ่งเด่นชัดขึ้นด้วยความก้าวหน้าของเวชศาสตร์แม่นยำและเทคโนโลยีเซลล์เดียว