Oligo dT perline magnetiche per la purificazione dell'mRNA

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BreveIntroduzione

Le perline magnetiche Oligo dT sono microsfere magnetiche covalentemente rivestite con fili di oligodeossitimina sulla loro superficie.regola di accoppiamento complementare di base, in cui i fili di Oligo dT si ibridiscono e si legano specificamente alCoda di poliamide, una caratteristica all'estremità 3' dell'RNA messaggero eucariota (mRNA), che consente la rapida e alta purezza della separazione dell'mRNA dall'RNA totale.

In poche parole, le perline magnetiche Oligo dT agiscono come un "camello magnetico specializzato", "estraendo" precisamente l'mRNA con una coda di PolyA dalla miscela di RNA.

Caratteristiche del prodotto

Alta specificità:Si lega specificamente all'RNA con una coda di PolyA, principalmente mRNA, rimuovendo efficacemente l'interferenza da rRNA e tRNA (che costituiscono oltre il 95% dell'RNA totale).

Alta purezza e integrità:Le reazioni chimiche delicate e i metodi di lavaggio non alcolici preservano meglio l'integrità e la purezza dell'RNAm, rendendolo adatto per applicazioni a valle che richiedono una qualità dell'RNA estremamente elevata.

Operazione rapida e semplice:L'intero processo può essere completato in 30-60 minuti, significativamente più velocemente del metodo tradizionale di cromatografia a colonne di cellulosa oligo dT, e non richiede centrifugazione.

Compatibilità ad alto throughput:Facilmente automatizzato, compatibile con i formati di piastre da 96 pozzi, soddisfa le esigenze di applicazioni ad alto rendimento come il sequenziamento.

Alta sensibilità:Adatto per l'isolamento dell'mRNA da campioni in traccia (ad esempio, un piccolo numero di cellule, campioni microdissecati da cattura laser, sezioni FFPE).

Sicuro e rispettoso dell'ambiente:Evitare l'uso di reagenti tossici come il fenolo e il cloroformio.

Principali campi di applicazione

Le perline magnetiche Oligo dT sono uno strumento essenziale in quasi tutti i campi che coinvolgono la ricerca sull'mRNA.

Sequenziamento di nuova generazione (NGS)

RNA-Seq:L'arricchimento di mRNA utilizzando perline magnetiche Oligo dT per la costruzione di librerie di sequenziamento consente l'analisi dei livelli di espressione genica, la scoperta di nuove trascrizioni,e rilevamento di splicing alternativoPer gli eucarioti, questo è il metodo più comune per la preparazione della libreria di mRNA.

Sequenziamento dell'RNA monocellulare (scRNA-seq):A livello di singola cellula, le perline magnetiche Oligo dT sono fondamentali per catturare l'mRNA rilasciato dopo la lisi cellulare.

cDNA Library Construction and Cloning (Costruzione e clonazione della libreria del cDNA)

L'mRNA purificato serve come modello per la sintesi del primo filamento di cDNA, utilizzato per la costruzione di librerie di cDNA, clonazione genica e studi funzionali.

Analisi dell'espressione genica

RT-qPCR:L'arricchimento dell'mRNA seguito da trascrizione inversa e PCR quantitativa produce dati di espressione genica più accurati e sensibili rimuovendo il rumore di fondo non-mRNA.

Blot settentrionaleRichiede mRNA di alta purezza come molecola bersaglio per la sonda.

Traduzione in vitro

Utilizzato nei sistemi di espressione proteica senza cellule, in cui l'mRNA purificato serve direttamente come modello per la sintesi della proteina bersaglio.

Ricerca e diagnosi delle malattie

Scoperta di biomarcatori:Isolare l'mRNA da campioni clinici (per esempio, sangue, tessuto tumorale) per cercare le firme di espressione genica associate alla malattia.

Detezione dell' agente patogeno:Alcuni RNA virali possiedono anche coda di PolyA e possono essere arricchiti utilizzando perline magnetiche Oligo dT per il rilevamento.

Informazioni tecniche

Riassunto

Le perline magnetiche Oligo dT sono uno strumento efficiente e affidabile per la purificazione dell'RNAm.Sono diventati una componente indispensabile della moderna biologia molecolare., della genomica e della trascriptomica, in particolare nel sequenziamento dell'RNA ad alto rendimento.La loro importanza aumenterà con il progresso della medicina di precisione e delle tecnologie monocellulari.