Microesferas Magnéticas Mag Oligo dT para Extração de mRNA e Purificação de mRNA, Alta Pureza

Extração de mRNA com Oligo dT e Purificação de mRNA

BreveIntrodução

As esferas magnéticas de Oligo dT são microesferas magnéticas revestidas covalentemente com fitas de oligodeoxitimidina em sua superfície. Seu princípio central utiliza a regra de emparelhamento complementar de bases, onde as fitas de Oligo dT se hibridizam e se ligam especificamente à cauda poliA, uma característica marcante na extremidade 3' do RNA mensageiro eucariótico (mRNA), permitindo a separação rápida e de alta pureza do mRNA do RNA total.

Simplificando, as esferas magnéticas de Oligo dT agem como um "pente magnético especializado", "extraindo" com precisão o mRNA com uma cauda poliA da mistura de RNA.

Características do Produto

Alta Especificidade: Liga-se especificamente ao RNA com uma cauda poliA, principalmente mRNA, removendo efetivamente a interferência de rRNA e tRNA (que constituem mais de 95% do RNA total).

Alta Pureza e Integridade: Reações químicas suaves e métodos de lavagem não alcoólicos preservam melhor a integridade e pureza do mRNA, tornando-o adequado para aplicações a jusante que exigem qualidade de RNA extremamente alta.

Operação Rápida e Simples: Todo o processo pode ser concluído em 30-60 minutos, significativamente mais rápido do que o método tradicional de cromatografia em coluna de celulose oligo dT e não requer centrifugação.

Compatibilidade de Alto Rendimento: Facilmente automatizado, compatível com formatos de placa de 96 poços, atendendo às demandas de aplicações de alto rendimento, como sequenciamento.

Alta Sensibilidade: Adequado para isolamento de mRNA a partir de amostras em traços (por exemplo, pequeno número de células, amostras microdissecadas por captura a laser, seções FFPE).

Seguro e Ecológico: Evita o uso de reagentes tóxicos como fenol e clorofórmio.

Principais Campos de Aplicação

As esferas magnéticas de Oligo dT são uma ferramenta essencial em quase todos os campos que envolvem pesquisa de mRNA.

Sequenciamento de Nova Geração (NGS)

RNA-Seq: Esta é a aplicação mais central. O enriquecimento de mRNA usando esferas magnéticas de Oligo dT para a construção de bibliotecas de sequenciamento permite a análise dos níveis de expressão gênica, a descoberta de novos transcritos e a detecção de splicing alternativo. Para eucariotos, este é o método mais comum para a preparação de bibliotecas de mRNA.

Sequenciamento de RNA de Célula Única (scRNA-seq): No nível de célula única, as esferas magnéticas de Oligo dT são fundamentais para capturar o mRNA liberado após a lise celular.

Construção e Clonagem de Biblioteca de cDNA

O mRNA purificado serve como modelo para sintetizar a primeira fita de cDNA, usado para construir bibliotecas de cDNA, clonagem de genes e estudos funcionais.

Análise da Expressão Gênica

RT-qPCR: O enriquecimento de mRNA seguido por transcrição reversa e PCR quantitativa produz dados de expressão gênica mais precisos e sensíveis, removendo o ruído de fundo não mRNA.

Northern Blot: Requer mRNA de alta pureza como molécula alvo para sondagem.

Tradução In Vitro

Usado em sistemas de expressão de proteínas sem células, onde o mRNA purificado serve diretamente como modelo para sintetizar a proteína alvo.

Pesquisa e Diagnóstico de Doenças

Descoberta de Biomarcadores: Isolamento de mRNA de amostras clínicas (por exemplo, sangue, tecido tumoral) para procurar assinaturas de expressão gênica associadas a doenças.

Detecção de Patógenos: Certos RNAs virais também possuem caudas poliA e podem ser enriquecidos usando esferas magnéticas de Oligo dT para detecção.

Informações Técnicas

As esferas magnéticas de Oligo dT são uma ferramenta eficiente e confiável para a purificação de mRNA. Renomadas por sua especificidade excepcional, operação simples e rápida e excelente compatibilidade, elas se tornaram um componente indispensável na biologia molecular moderna, genômica e pesquisa transcriptômica, particularmente no sequenciamento de RNA de alto rendimento. Sua importância se tornará ainda mais proeminente com o avanço da medicina de precisão e das tecnologias de célula única.