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Extracción de ARNm con Oligo dT y Purificación de ARNm

ResumenIntroducción

Las perlas magnéticas de Oligo dT son microesferas magnéticas recubiertas covalentemente con hebras de oligodesoxitimidina en su superficie. Su principio fundamental utiliza la regla de emparejamiento complementario de bases, donde las hebras de Oligo dT se hibridan y se unen específicamente a la cola de poliA, una característica distintiva en el extremo 3' del ARN mensajero (ARNm) eucariota, lo que permite la separación rápida y de alta pureza del ARNm del ARN total.

En pocas palabras, las perlas magnéticas de Oligo dT actúan como un "peine magnético especializado", "extrayendo" con precisión el ARNm con una cola de poliA de la mezcla de ARN.

Características del producto

Alta especificidad: Se une específicamente al ARN con una cola de poliA, principalmente ARNm, eliminando eficazmente la interferencia del ARNr y ARNt (que constituyen más del 95% del ARN total).

Alta pureza e integridad: Las reacciones químicas suaves y los métodos de lavado no alcohólicos preservan mejor la integridad y pureza del ARNm, haciéndolo adecuado para aplicaciones posteriores que requieren una calidad de ARN extremadamente alta.

Operación rápida y sencilla: Todo el proceso se puede completar en 30-60 minutos, significativamente más rápido que el método tradicional de cromatografía en columna de celulosa oligo dT, y no requiere centrifugación.

Compatibilidad de alto rendimiento: Fácilmente automatizado, compatible con formatos de placa de 96 pocillos, satisfaciendo las demandas de aplicaciones de alto rendimiento como la secuenciación.

Alta sensibilidad: Adecuado para el aislamiento de ARNm de muestras traza (por ejemplo, un pequeño número de células, muestras microdiseccionadas por captura láser, secciones FFPE).

Seguro y respetuoso con el medio ambiente: Evita el uso de reactivos tóxicos como fenol y cloroformo.

Principales campos de aplicación

Las perlas magnéticas de Oligo dT son una herramienta esencial en casi todos los campos que involucran la investigación del ARNm.

Secuenciación de próxima generación (NGS)

RNA-Seq: Esta es la aplicación más fundamental. El enriquecimiento de ARNm utilizando perlas magnéticas de Oligo dT para la construcción de bibliotecas de secuenciación permite el análisis de los niveles de expresión génica, el descubrimiento de transcritos novedosos y la detección de empalme alternativo. Para los eucariotas, este es el método más común para la preparación de bibliotecas de ARNm.

Secuenciación de ARN de célula única (scRNA-seq): A nivel de célula única, las perlas magnéticas de Oligo dT son clave para capturar el ARNm liberado después de la lisis celular.

Construcción y clonación de bibliotecas de ADNc

El ARNm purificado sirve como plantilla para sintetizar la primera hebra de ADNc, utilizada para construir bibliotecas de ADNc, clonación de genes y estudios funcionales.

Análisis de la expresión génica

RT-qPCR: El enriquecimiento de ARNm seguido de transcripción inversa y PCR cuantitativa produce datos de expresión génica más precisos y sensibles al eliminar el ruido de fondo que no es ARNm.

Transferencia de Northern: Requiere ARNm de alta pureza como molécula diana para la hibridación.

Traducción in vitro

Se utiliza en sistemas de expresión de proteínas libres de células, donde el ARNm purificado sirve directamente como plantilla para sintetizar la proteína diana.

Investigación y diagnóstico de enfermedades

Descubrimiento de biomarcadores: Aislamiento de ARNm de muestras clínicas (por ejemplo, sangre, tejido tumoral) para buscar firmas de expresión génica asociadas a enfermedades.

Detección de patógenos: Ciertos ARN virales también poseen colas de poliA y pueden ser enriquecidos utilizando perlas magnéticas de Oligo dT para su detección.

Información técnica

Resumen

Las perlas magnéticas de Oligo dT son una herramienta eficiente y confiable para la purificación de ARNm. Reconocidas por su excepcional especificidad, operación simple y rápida, y excelente compatibilidad, se han convertido en un componente indispensable en la biología molecular, la genómica y la investigación transcriptómica modernas, particularmente en la secuenciación de ARN de alto rendimiento. Su importancia será aún más prominente con el avance de la medicina de precisión y las tecnologías de célula única.