Hạt từ tính Mag Oligo DT để chiết tách mRNA và tinh sạch mRNA, độ tinh khiết cao

Tách chiết mRNA bằng hạt từ Oligo dT và tinh sạch mRNA

Tóm tắtGiới thiệu

Hạt từ Oligo dT là các vi cầu từ tính được phủ cộng hóa trị với các sợi oligodeoxythymine trên bề mặt. Nguyên tắc cốt lõi của chúng sử dụng quy tắc ghép cặp bổ sung base, trong đó các sợi Oligo dT lai hóa và liên kết đặc hiệu với đuôi PolyA, một đặc điểm đặc trưng ở đầu 3' của RNA thông tin (mRNA) của sinh vật nhân chuẩn, cho phép tách mRNA khỏi tổng RNA một cách nhanh chóng và có độ tinh khiết cao.

Nói một cách đơn giản, hạt từ Oligo dT hoạt động như một "chiếc lược từ tính chuyên dụng", chính xác "tách chiết" mRNA có đuôi PolyA từ hỗn hợp RNA.

Đặc điểm sản phẩm

Độ đặc hiệu cao: Liên kết đặc hiệu với RNA có đuôi PolyA, chủ yếu là mRNA, loại bỏ hiệu quả sự can thiệp từ rRNA và tRNA (chiếm hơn 95% tổng RNA).

Độ tinh khiết và tính toàn vẹn cao: Các phản ứng hóa học nhẹ nhàng và phương pháp rửa không cồn giúp bảo tồn tốt hơn tính toàn vẹn và độ tinh khiết của mRNA, làm cho nó phù hợp với các ứng dụng hạ nguồn yêu cầu chất lượng RNA cực kỳ cao.

Vận hành nhanh chóng và đơn giản: Toàn bộ quá trình có thể được hoàn thành trong vòng 30-60 phút, nhanh hơn đáng kể so với phương pháp sắc ký cột cellulose oligo dT truyền thống và không yêu cầu ly tâm.

Khả năng tương thích thông lượng cao: Dễ dàng tự động hóa, tương thích với định dạng tấm 96 giếng, đáp ứng nhu cầu của các ứng dụng thông lượng cao như giải trình tự.

Độ nhạy cao: Thích hợp để phân lập mRNA từ các mẫu vết (ví dụ: số lượng tế bào nhỏ, mẫu cắt vi phẫu bằng laser, các phần FFPE).

An toàn và thân thiện với môi trường: Tránh sử dụng các thuốc thử độc hại như phenol và chloroform.

Các lĩnh vực ứng dụng chính

Hạt từ Oligo dT là một công cụ thiết yếu trong hầu hết các lĩnh vực liên quan đến nghiên cứu mRNA.

Giải trình tự thế hệ mới (NGS)

RNA-Seq: Đây là ứng dụng cốt lõi nhất. Làm giàu mRNA bằng cách sử dụng hạt từ Oligo dT để xây dựng thư viện giải trình tự cho phép phân tích mức độ biểu hiện gen, khám phá các bản phiên mã mới và phát hiện các nối thay thế. Đối với sinh vật nhân chuẩn, đây là phương pháp phổ biến nhất để chuẩn bị thư viện mRNA.

Giải trình tự RNA đơn bào (scRNA-seq): Ở cấp độ đơn bào, hạt từ Oligo dT là chìa khóa để thu giữ mRNA được giải phóng sau khi ly giải tế bào.

Xây dựng và nhân bản thư viện cDNA

mRNA tinh sạch đóng vai trò là khuôn để tổng hợp sợi đầu tiên của cDNA, được sử dụng để xây dựng thư viện cDNA, nhân bản gen và các nghiên cứu chức năng.

Phân tích biểu hiện gen

RT-qPCR: Làm giàu mRNA sau đó phiên mã ngược và PCR định lượng tạo ra dữ liệu biểu hiện gen chính xác và nhạy hơn bằng cách loại bỏ nhiễu nền không phải mRNA.

Northern Blot: Yêu cầu mRNA có độ tinh khiết cao làm phân tử đích để dò.

Dịch mã in vitro

Được sử dụng trong các hệ thống biểu hiện protein không tế bào, trong đó mRNA tinh sạch trực tiếp đóng vai trò là khuôn để tổng hợp protein đích.

Nghiên cứu và chẩn đoán bệnh

Khám phá dấu ấn sinh học: Phân lập mRNA từ các mẫu lâm sàng (ví dụ: máu, mô khối u) để tìm kiếm các dấu hiệu biểu hiện gen liên quan đến bệnh.

Phát hiện mầm bệnh: Một số RNA virus cũng có đuôi PolyA và có thể được làm giàu bằng cách sử dụng hạt từ Oligo dT để phát hiện.

Thông tin kỹ thuật

Hạt từ Oligo dT là một công cụ hiệu quả và đáng tin cậy để tinh sạch mRNA. Nổi tiếng với độ đặc hiệu vượt trội, thao tác đơn giản và nhanh chóng, cùng với khả năng tương thích tuyệt vời, chúng đã trở thành một thành phần không thể thiếu trong sinh học phân tử, bộ gen và nghiên cứu phiên mã hiện đại, đặc biệt là trong giải trình tự RNA thông lượng cao. Tầm quan trọng của chúng sẽ ngày càng trở nên nổi bật với sự tiến bộ của y học chính xác và công nghệ đơn bào.