مهره‌های مغناطیسی Mag Oligo DT استخراج mRNA خالص‌سازی mRNA مهره‌های مغناطیسی خلوص بالا

استخراج mRNA با استفاده از اولیگو dT و خالص‌سازی mRNA

خلاصهمقدمه

دانه‌های مغناطیسی اولیگو dT، ریزکره‌های مغناطیسی هستند که به‌طور کووالانسی با رشته‌های الیگودئوکسی‌تایمین بر روی سطح خود پوشانده شده‌اند. اصل اساسی آن‌ها از قاعده جفت‌شدن مکمل بازها استفاده می‌کند، جایی که رشته‌های اولیگو dT به‌طور خاص با دم پلی A، که یک ویژگی مشخصه در انتهای 3' RNA پیام‌رسان یوکاریوتی (mRNA) است، هیبرید می‌شوند و به آن متصل می‌شوند، که امکان جداسازی سریع و با خلوص بالای mRNA از کل RNA را فراهم می‌کند.

به‌عبارت ساده، دانه‌های مغناطیسی اولیگو dT مانند یک «شانه مغناطیسی تخصصی» عمل می‌کنند که mRNA را با دم پلی A از مخلوط RNA به‌دقت «استخراج» می‌کنند.

ویژگی‌های محصول

اختصاصی بودن بالا: به‌طور خاص به RNA با دم پلی A، عمدتاً mRNA، متصل می‌شود و به‌طور موثر تداخل ناشی از rRNA و tRNA (که بیش از 95٪ از کل RNA را تشکیل می‌دهند) را حذف می‌کند.

خلوص و یکپارچگی بالا: واکنش‌های شیمیایی ملایم و روش‌های شستشوی غیر الکلی، یکپارچگی و خلوص mRNA را بهتر حفظ می‌کنند و آن را برای کاربردهای پایین‌دستی که به کیفیت RNA بسیار بالا نیاز دارند، مناسب می‌سازد.

عملکرد سریع و ساده: کل فرآیند را می‌توان در عرض 30 تا 60 دقیقه تکمیل کرد که به‌طور قابل‌توجهی سریع‌تر از روش کروماتوگرافی ستون سلولز اولیگو dT سنتی است و نیازی به سانتریفیوژ ندارد.

سازگاری با توان عملیاتی بالا: به‌راحتی خودکار می‌شود، با فرمت‌های صفحه 96 چاهی سازگار است و نیازهای کاربردهای با توان عملیاتی بالا مانند توالی‌یابی را برآورده می‌کند.

حساسیت بالا: برای جداسازی mRNA از نمونه‌های ردیابی (به‌عنوان مثال، تعداد کمی سلول، نمونه‌های میکرو دایسکشن با لیزر، بخش‌های FFPE) مناسب است.

ایمن و سازگار با محیط زیست: از استفاده از معرف‌های سمی مانند فنل و کلروفرم اجتناب می‌کند.

زمینه‌های اصلی کاربرد

دانه‌های مغناطیسی اولیگو dT یک ابزار ضروری در تقریباً تمام زمینه‌های مرتبط با تحقیقات mRNA هستند.

توالی‌یابی نسل بعدی (NGS)

RNA-Seq: این اصلی‌ترین کاربرد است. غنی‌سازی mRNA با استفاده از دانه‌های مغناطیسی اولیگو dT برای ساخت کتابخانه توالی‌یابی، امکان تجزیه و تحلیل سطوح بیان ژن، کشف رونوشت‌های جدید و تشخیص اتصال جایگزین را فراهم می‌کند. برای یوکاریوت‌ها، این رایج‌ترین روش برای تهیه کتابخانه mRNA است.

توالی‌یابی RNA تک سلولی (scRNA-seq): در سطح تک سلولی، دانه‌های مغناطیسی اولیگو dT برای گرفتن mRNA آزاد شده پس از لیز سلولی کلیدی هستند.

ساخت و کلونینگ کتابخانه cDNA

mRNA خالص‌شده به‌عنوان الگو برای سنتز رشته اول cDNA عمل می‌کند که برای ساخت کتابخانه‌های cDNA، کلونینگ ژن و مطالعات عملکردی استفاده می‌شود.

تجزیه و تحلیل بیان ژن

RT-qPCR: غنی‌سازی mRNA و به‌دنبال آن رونویسی معکوس و PCR کمی، با حذف نویز پس‌زمینه غیر mRNA، داده‌های بیان ژن دقیق‌تر و حساس‌تری را به‌دست می‌دهد.

بلاتینگ شمالی: به mRNA با خلوص بالا به‌عنوان مولکول هدف برای کاوش نیاز دارد.

ترجمه درون‌شیشه‌ای

در سیستم‌های بیان پروتئین بدون سلول استفاده می‌شود، جایی که mRNA خالص‌شده مستقیماً به‌عنوان الگو برای سنتز پروتئین هدف عمل می‌کند.

تحقیقات و تشخیص بیماری

کشف نشانگرهای زیستی: جداسازی mRNA از نمونه‌های بالینی (به‌عنوان مثال، خون، بافت تومور) برای جستجوی نشانه‌های بیان ژن مرتبط با بیماری.

تشخیص پاتوژن: برخی از RNAهای ویروسی نیز دارای دم پلی A هستند و می‌توانند با استفاده از دانه‌های مغناطیسی اولیگو dT برای تشخیص غنی شوند.

اطلاعات فنی

دانه‌های مغناطیسی اولیگو dT یک ابزار کارآمد و قابل اعتماد برای خالص‌سازی mRNA هستند. آن‌ها که به‌خاطر اختصاصی بودن استثنایی، عملکرد ساده و سریع و سازگاری عالی خود مشهور هستند، به یک جزء ضروری در زیست‌شناسی مولکولی مدرن، ژنومیک و تحقیقات ترانسکریپتومیک، به‌ویژه در توالی‌یابی RNA با توان عملیاتی بالا، تبدیل شده‌اند. اهمیت آن‌ها با پیشرفت پزشکی دقیق و فناوری‌های تک سلولی برجسته‌تر خواهد شد.