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मैग ओलिगो डीटी एमआरएनए निष्कर्षण एमआरएनए शुद्धिकरण
संक्षिप्तपरिचय
ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती चुंबकीय माइक्रोस्फीयर हैं जो उनकी सतह पर ओलिगोडीऑक्सीथाइमिन स्ट्रैंड्स के साथ सहसंयोजक रूप से लेपित होते हैं। उनका मूल सिद्धांत बेस पूरक युग्मन नियम का उपयोग करता है, जहां ओलिगो डीटी स्ट्रैंड विशेष रूप से संकरण करते हैं और पॉलीए टेल से जुड़ते हैं, जो यूकेरियोटिक मैसेंजर आरएनए (एमआरएनए) के 3' सिरे पर एक विशिष्ट विशेषता है, जो कुल आरएनए से एमआरएनए के तेजी से और उच्च-शुद्धता पृथक्करण को सक्षम करता है।
सीधे शब्दों में कहें, तो ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती एक "विशेष चुंबकीय कंघी" की तरह काम करते हैं, जो आरएनए मिश्रण से पॉलीए टेल के साथ एमआरएनए को सटीक रूप से "निकालते" हैं।
उत्पाद विशेषताएं
उच्च विशिष्टता: विशेष रूप से पॉलीए टेल के साथ आरएनए से जुड़ता है, मुख्य रूप से एमआरएनए, प्रभावी ढंग से आरआरएनए और टीआरएनए (जो कुल आरएनए का 95% से अधिक बनाते हैं) के हस्तक्षेप को हटाता है।
उच्च शुद्धता और अखंडता: कोमल रासायनिक प्रतिक्रियाएं और गैर-अल्कोहल धोने के तरीके एमआरएनए की अखंडता और शुद्धता को बेहतर ढंग से संरक्षित करते हैं, जिससे यह डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त हो जाता है जिसके लिए अत्यधिक उच्च आरएनए गुणवत्ता की आवश्यकता होती है।
तेज़ और सरल संचालन: पूरी प्रक्रिया 30-60 मिनट के भीतर पूरी की जा सकती है, जो पारंपरिक ओलिगो डीटी सेलूलोज़ कॉलम क्रोमैटोग्राफी विधि की तुलना में काफी तेज़ है, और इसमें सेंट्रीफ्यूगेशन की आवश्यकता नहीं होती है।
उच्च-थ्रूपुट संगतता: आसानी से स्वचालित, 96-वेल प्लेट प्रारूपों के साथ संगत, अनुक्रमण जैसे उच्च-थ्रूपुट अनुप्रयोगों की मांगों को पूरा करता है।
उच्च संवेदनशीलता: ट्रेस नमूनों (जैसे, कोशिकाओं की छोटी संख्या, लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्टेड नमूने, एफएफपीई सेक्शन) से एमआरएनए अलगाव के लिए उपयुक्त।
सुरक्षित और पर्यावरण के अनुकूल: फेनोल और क्लोरोफॉर्म जैसे विषाक्त अभिकर्मकों के उपयोग से बचाता है।
मुख्य अनुप्रयोग क्षेत्र
ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती एमआरएनए अनुसंधान से जुड़े लगभग सभी क्षेत्रों में एक आवश्यक उपकरण हैं।
अगली पीढ़ी की अनुक्रमण (एनजीएस)
आरएनए-सीक्वेंस: यह सबसे महत्वपूर्ण अनुप्रयोग है। अनुक्रमण लाइब्रेरी निर्माण के लिए ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती का उपयोग करके एमआरएनए को समृद्ध करने से जीन अभिव्यक्ति स्तरों का विश्लेषण, उपन्यास ट्रांसक्रिप्ट की खोज और वैकल्पिक स्प्लिसिंग का पता लगाने की अनुमति मिलती है। यूकेरियोट्स के लिए, यह एमआरएनए लाइब्रेरी तैयार करने का सबसे आम तरीका है।
सिंगल-सेल आरएनए अनुक्रमण (एससीआरएनए-सीक्वेंस): सिंगल-सेल स्तर पर, ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती सेल लाइसिस के बाद जारी एमआरएनए को कैप्चर करने की कुंजी हैं।
सीडीएनए लाइब्रेरी निर्माण और क्लोनिंग
शुद्ध एमआरएनए सीडीएनए की पहली स्ट्रैंड को संश्लेषित करने के लिए टेम्पलेट के रूप में कार्य करता है, जिसका उपयोग सीडीएनए लाइब्रेरी, जीन क्लोनिंग और कार्यात्मक अध्ययन के निर्माण के लिए किया जाता है।
जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण
आरटी-क्यूपीसीआर: एमआरएनए को समृद्ध करने के बाद रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन और मात्रात्मक पीसीआर गैर-एमआरएनए पृष्ठभूमि शोर को हटाकर अधिक सटीक और संवेदनशील जीन अभिव्यक्ति डेटा उत्पन्न करता है।
उत्तरी धब्बा: जांच के लिए लक्ष्य अणु के रूप में उच्च-शुद्धता एमआरएनए की आवश्यकता होती है।
इन विट्रो अनुवाद
सेल-फ्री प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणालियों में उपयोग किया जाता है, जहां शुद्ध एमआरएनए सीधे लक्ष्य प्रोटीन को संश्लेषित करने के लिए टेम्पलेट के रूप में कार्य करता है।
रोग अनुसंधान और निदान
बायोमार्कर खोज: रोग से जुड़े जीन अभिव्यक्ति संकेतों की खोज के लिए नैदानिक नमूनों (जैसे, रक्त, ट्यूमर ऊतक) से एमआरएनए को अलग करना।
रोगज़नक़ का पता लगाना: कुछ वायरल आरएनए में पॉलीए टेल भी होते हैं और उनका पता लगाने के लिए ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती का उपयोग करके उन्हें समृद्ध किया जा सकता है।
तकनीकी जानकारी
| मैग ओलिगो डीटी | |
| आर्ट.नं | एनबीटी501 |
| कण आकार | 1μm |
| सांद्रता | 5mg/ml |
| संरक्षक | अति शुद्ध जल |
| वैधताएमएफजी से 24 महीने | अनुप्रयोग |
| एमआरएनए निष्कर्षण/शुद्धिकरण | के लिए उपयुक्त |
| विभिन्न एमआरएनए नमूने | टिप्पणियाँ |
| केवल अनुसंधान उपयोग के लिए | सारांश |
ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती एमआरएनए शुद्धिकरण के लिए एक कुशल और विश्वसनीय उपकरण हैं। अपनी असाधारण विशिष्टता, सरल और तेज़ संचालन और उत्कृष्ट संगतता के लिए प्रसिद्ध, वे आधुनिक आणविक जीव विज्ञान, जीनोमिक्स और ट्रांसक्रिप्टोमिक्स अनुसंधान, विशेष रूप से उच्च-थ्रूपुट आरएनए अनुक्रमण में एक अपरिहार्य घटक बन गए हैं। सटीक चिकित्सा और सिंगल-सेल तकनीकों की प्रगति के साथ उनका महत्व और भी प्रमुख हो जाएगा।
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