Contas Magnéticas Oligo dT para Purificação de mRNA

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ResumoIntrodução

Os grânulos magnéticos Oligo dT são microesferas magnéticas cobertas covalentemente com fios de oligodeoxitimina na sua superfície.Regra de acoplamento base complementar, onde os filamentos de Oligo dT hibridizam especificamente e ligam-se aoPoliA cauda, uma característica na extremidade 3' do ARN mensageiro eucariótico (ARNm), permitindo a separação rápida e de alta pureza do ARNm do ARN total.

Simplificando, as contas magnéticas do Oligo dT agem como um "pente magnético especializado", "extraindo" precisamente o mRNA com uma cauda de PolyA da mistura de RNA.

Características do produto

Alta especificidade:Liga-se especificamente ao ARN com uma cauda de PolyA, principalmente ARNm, removendo efetivamente a interferência do ARNr e do ARNt (que constituem mais de 95% do ARN total).

Alta pureza e integridade:Reacções químicas suaves e métodos de lavagem sem álcool preservam melhor a integridade e pureza do ARNm, tornando-o adequado para aplicações a jusante que exijam uma qualidade de ARN extremamente elevada.

Operação rápida e simples:O processo inteiro pode ser concluído em 30-60 minutos, significativamente mais rápido do que o método tradicional de cromatografia de coluna de celulose de oligo dT, e não requer centrífugação.

Compatibilidade com alta capacidade de transferência:Fácil de automatizar, compatível com formatos de placas de 96 poços, satisfazendo as demandas de aplicações de alto rendimento como o sequenciamento.

Alta sensibilidade:Adequado para o isolamento de ARNm a partir de amostras de rastreamento (por exemplo, pequenos números de células, amostras microdissecadas de captura a laser, secções de FFPE).

Segura e respeitosa do ambiente:Evitar o uso de reagentes tóxicos como fenol e cloroformo.

Principais domínios de aplicação

As contas magnéticas Oligo dT são uma ferramenta essencial em quase todos os campos envolvendo a pesquisa de ARNm.

Sequenciamento de próxima geração (NGS)

RNA-Seq:O enriquecimento de mRNA usando contas magnéticas Oligo dT para a construção de bibliotecas de sequenciamento permite a análise dos níveis de expressão genética, descoberta de novas transcrições,e detecção de emplaçamento alternativoPara os eucariotas, este é o método mais comum para a preparação da biblioteca de mRNA.

Sequenciamento de ARN unicelular (scRNA-seq):No nível de célula única, as contas magnéticas Oligo dT são fundamentais para capturar o mRNA liberado após a lisise celular.

Construção e Clonagem de Biblioteca de cDNA

O mRNA purificado serve como modelo para sintetizar a primeira cadeia de cDNA, usada para construir bibliotecas de cDNA, clonagem de genes e estudos funcionais.

Análise da expressão genética

RT-qPCR:O enriquecimento do ARNm seguido de transcrição reversa e PCR quantitativa produz dados de expressão genética mais precisos e sensíveis, removendo o ruído de fundo não do ARNm.

Bloco Norte:Requer mRNA de alta pureza como molécula alvo para sondagem.

Tradução In Vitro

Usado em sistemas de expressão de proteínas livres de células, onde o ARNm purificado serve diretamente como modelo para a síntese da proteína alvo.

Pesquisa e diagnóstico de doenças

Descoberta de biomarcadores:Isolar mRNA de amostras clínicas (por exemplo, sangue, tecido tumoral) para procurar assinaturas de expressão genética associadas à doença.

Detecção de patógenos:Certos RNAs virais também possuem caudas PolyA e podem ser enriquecidos usando contas magnéticas Oligo dT para detecção.

Informações técnicas

Resumo

As contas magnéticas Oligo dT são uma ferramenta eficiente e confiável para purificação de mRNA.tornaram-se um componente indispensável na biologia molecular moderna, genômica e transcriptômica, particularmente no seqüenciamento de RNA de alto rendimento.A sua importância tornar-se-á ainda mais evidente com o avanço da medicina de precisão e das tecnologias unicelulares.