اولیگو dT گره های مغناطیسی برای تصفیه mRNA

استخراج mRNA با مگنتیت الیگو dT خالص‌سازی mRNA

خلاصه مقدمه

مهره‌های مغناطیسی الیگو dT، میکروسفر‌های مغناطیسی هستند که به صورت کووالانسی با رشته‌های الیگودئوکسی‌تیمین بر روی سطح خود پوشش داده شده‌اند. اصل اساسی آن‌ها از قانون جفت شدن مکمل بازها استفاده می‌کند، که در آن رشته‌های الیگو dT به طور خاص با دم PolyA، یک ویژگی مشخص در انتهای 3' mRNA یوکاریوتی، هیبرید شده و به آن متصل می‌شوند و جداسازی سریع و با خلوص بالای mRNA از کل RNA را امکان‌پذیر می‌سازد.به زبان ساده، مهره‌های مغناطیسی الیگو dT مانند یک "شانه مغناطیسی تخصصی" عمل می‌کنند و mRNA را با دم PolyA از مخلوط RNA به طور دقیق "استخراج" می‌کنند.ویژگی‌های محصولاختصاصیت بالا: به طور خاص به RNA با دم PolyA، عمدتاً mRNA، متصل می‌شود و به طور مؤثر تداخل rRNA و tRNA (که بیش از 95% کل RNA را تشکیل می‌دهند) را حذف می‌کند.

خلوص و یکپارچگی بالا:

واکنش‌های شیمیایی ملایم و روش‌های شستشوی غیرالکلی، یکپارچگی و خلوص mRNA را بهتر حفظ می‌کنند و آن را برای کاربردهای پایین‌دستی که به کیفیت بسیار بالای RNA نیاز دارند، مناسب می‌سازد.

عملیات سریع و ساده: کل فرآیند را می‌توان در عرض 30-60 دقیقه تکمیل کرد، که به طور قابل توجهی سریع‌تر از روش سنتی کروماتوگرافی ستونی سلولز الیگو dT است و نیازی به سانتریفیوژ ندارد.

سازگاری با توان عملیاتی بالا: به راحتی خودکار می‌شود، با فرمت‌های پلیت 96 چاهکی سازگار است و نیازهای برنامه‌های کاربردی با توان عملیاتی بالا مانند توالی‌یابی را برآورده می‌کند.

حساسیت بالا: مناسب برای جداسازی mRNA از نمونه‌های ردیابی (مانند تعداد کمی سلول، نمونه‌های میکرو دیسکت شده با لیزر، مقاطع FFPE).

ایمن و سازگار با محیط زیست: از استفاده از معرف‌های سمی مانند فنل و کلروفرم اجتناب می‌کند.

زمینه‌های کاربردی اصلیمهره‌های مغناطیسی الیگو dT ابزاری ضروری در تقریباً تمام زمینه‌های مرتبط با تحقیقات mRNA هستند.

توالی‌یابی نسل بعدی (NGS)RNA-Seq:

این اصلی‌ترین کاربرد است. غنی‌سازی mRNA با استفاده از مهره‌های مغناطیسی الیگو dT برای ساخت کتابخانه توالی‌یابی، امکان تجزیه و تحلیل سطوح بیان ژن، کشف رونوشت‌های جدید و تشخیص اتصال متناوب را فراهم می‌کند. برای یوکاریوت‌ها، این رایج‌ترین روش برای آماده‌سازی کتابخانه mRNA است.

توالی‌یابی RNA تک سلولی (scRNA-seq):

در سطح تک سلولی، مهره‌های مغناطیسی الیگو dT برای گرفتن mRNA آزاد شده پس از لیز سلول کلیدی هستند.

ساخت کتابخانه cDNA و کلونینگmRNA خالص شده به عنوان الگو برای سنتز اولین رشته cDNA استفاده می‌شود که برای ساخت کتابخانه‌های cDNA، کلونینگ ژن و مطالعات عملکردی به کار می‌رود.

تجزیه و تحلیل بیان ژنRT-qPCR:

غنی‌سازی mRNA و سپس رونویسی معکوس و PCR کمی، داده‌های بیان ژن دقیق‌تر و حساس‌تری را با حذف نویز پس‌زمینه غیر mRNA ارائه می‌دهد.

بلات شمالی:

به mRNA با خلوص بالا به عنوان مولکول هدف برای کاوش نیاز دارد.

ترجمه آزمایشگاهیدر سیستم‌های بیان پروتئین بدون سلول استفاده می‌شود، که در آن mRNA خالص شده مستقیماً به عنوان الگو برای سنتز پروتئین هدف عمل می‌کند.

تحقیق و تشخیص بیماریکشف نشانگر زیستی:

جداسازی mRNA از نمونه‌های بالینی (مانند خون، بافت تومور) برای جستجوی امضاهای بیان ژن مرتبط با بیماری.

تشخیص پاتوژن:

برخی از RNAهای ویروسی نیز دارای دم PolyA هستند و می‌توانند برای تشخیص با استفاده از مهره‌های مغناطیسی الیگو dT غنی شوند.

اطلاعات فنیمگنتیت الیگو dT

شماره کالاNBT501

اندازه ذرات