एमआरएनए शुद्धिकरण के लिए ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती

मैग ओलिगो डीटी एमआरएनए निष्कर्षण एमआरएनए शुद्धिकरण

संक्षिप्तपरिचय

ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती चुंबकीय माइक्रोस्फीयर होते हैं जिनकी सतह पर ओलिगोडीओक्सीथिमाइन स्ट्रैंड्स के साथ सहसंयोजक रूप से लेपित होते हैं।आधार पूरक युग्मन नियम, जहां ओलिगो डीटी स्ट्रैंड्स विशेष रूप से हाइब्रिडाइज करते हैं औरपॉलीए कूबड़, यूकेरियोटिक मेसेंजर आरएनए (एमआरएनए) के 3' अंत में एक विशेषता है, जो कुल आरएनए से एमआरएनए के तेजी से और उच्च शुद्धता वाले पृथक्करण को सक्षम करता है।

सरल शब्दों में कहें तो ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती एक "विशेष चुंबकीय कंघी" की तरह कार्य करते हैं, जो आरएनए मिश्रण से एक पॉलीए पूंछ के साथ एमआरएनए को ठीक से "निकाल" करते हैं।

उत्पाद की विशेषताएं

उच्च विशिष्टताःविशेष रूप से एक PolyA पूंछ के साथ RNA से बंधता है, मुख्य रूप से mRNA, प्रभावी रूप से rRNA और tRNA (जो कुल RNA का 95% से अधिक बनाते हैं) से हस्तक्षेप को हटाता है।

उच्च शुद्धता और अखंडता:सौम्य रासायनिक प्रतिक्रियाएं और गैर-मादक धोने की विधियां एमआरएनए की अखंडता और शुद्धता को बेहतर रूप से संरक्षित करती हैं, जिससे यह अत्यधिक उच्च आरएनए गुणवत्ता की आवश्यकता वाले डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त हो जाता है।

त्वरित और सरल संचालन:पूरी प्रक्रिया को 30-60 मिनट के भीतर पूरा किया जा सकता है, जो पारंपरिक ओलिगो डीटी सेल्युलोज कॉलम क्रोमैटोग्राफी विधि की तुलना में काफी तेज है, और इसके लिए कोई सेंट्रिफ्यूगेशन की आवश्यकता नहीं है।

उच्च थ्रूपुट संगतताःआसानी से स्वचालित, 96-कुएं प्लेट प्रारूपों के साथ संगत, अनुक्रमण जैसे उच्च-प्रवाह अनुप्रयोगों की मांगों को पूरा करता है।

उच्च संवेदनशीलता:एमआरएनए को ट्रेस नमूने से अलग करने के लिए उपयुक्त (जैसे, कोशिकाओं की छोटी संख्या, लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्टेड नमूने, एफएफपीई सेक्शन) ।

सुरक्षित और पर्यावरण के अनुकूल:फेनोल और क्लोरोफॉर्म जैसे विषाक्त अभिकर्मकों के उपयोग से बचें।

मुख्य अनुप्रयोग क्षेत्र

ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती एमआरएनए अनुसंधान से जुड़े लगभग सभी क्षेत्रों में एक आवश्यक उपकरण हैं।

अगली पीढ़ी का अनुक्रमण (एनजीएस)

आरएनए-सेक:यह सबसे मुख्य अनुप्रयोग है। ओलिगो डीटी चुंबकीय मोतियों का उपयोग करके एमआरएनए को समृद्ध करने से जीन अभिव्यक्ति के स्तर का विश्लेषण, उपन्यास प्रतिलेखों की खोज,और वैकल्पिक स्प्लिसिंग का पता लगानायूकेरियोट्स के लिए, यह एमआरएनए पुस्तकालय की तैयारी के लिए सबसे आम विधि है।

एकल-कोशिका आरएनए अनुक्रमण (scRNA-seq):एकल-कोशिका स्तर पर, ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती सेल लिसिस के बाद जारी एमआरएनए को पकड़ने के लिए महत्वपूर्ण हैं।

सीडीएनए पुस्तकालय निर्माण और क्लोनिंग

शुद्ध एमआरएनए सीडीएनए के पहले स्ट्रैंड के संश्लेषण के लिए टेम्पलेट के रूप में कार्य करता है, जिसका उपयोग सीडीएनए पुस्तकालयों, जीन क्लोनिंग और कार्यात्मक अध्ययन के निर्माण के लिए किया जाता है।

जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण

RT-qPCR:रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन और मात्रात्मक पीसीआर के बाद एमआरएनए को समृद्ध करने से गैर-एमआरएनए पृष्ठभूमि शोर को हटाकर अधिक सटीक और संवेदनशील जीन अभिव्यक्ति डेटा प्राप्त होता है।

उत्तरी धब्बा:जांच के लिए लक्ष्य अणु के रूप में उच्च शुद्धता वाले एमआरएनए की आवश्यकता होती है।

इन विट्रो अनुवाद

कोशिका मुक्त प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणालियों में प्रयोग किया जाता है, जहां शुद्ध एमआरएनए सीधे लक्ष्य प्रोटीन के संश्लेषण के लिए टेम्पलेट के रूप में कार्य करता है।

रोग अनुसंधान और निदान

बायोमार्कर डिस्कवरीःरोग से संबंधित जीन अभिव्यक्ति हस्ताक्षरों की खोज के लिए नैदानिक नमूनों (जैसे, रक्त, ट्यूमर ऊतक) से एमआरएनए को अलग करना।

रोगजनक का पता लगाना:कुछ वायरल आरएनए में पॉलीए पूंछ भी होती है और इसका पता लगाने के लिए ओलिगो डीटी चुंबकीय मोतियों का उपयोग करके समृद्ध किया जा सकता है।

तकनीकी जानकारी

सारांश

ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती एमआरएनए शुद्धिकरण के लिए एक कुशल और विश्वसनीय उपकरण हैं। उनकी असाधारण विशिष्टता, सरल और तेजी से संचालन और उत्कृष्ट संगतता के लिए प्रसिद्ध हैं,वे आधुनिक आणविक जीव विज्ञान में एक अपरिहार्य घटक बन गए हैं, जीनोमिक्स और ट्रांसक्रिप्टोमिक्स अनुसंधान, विशेष रूप से उच्च-थ्रूपुट आरएनए अनुक्रमण में।सटीक चिकित्सा और एकल-कोशिका प्रौद्योगिकियों के विकास के साथ इनका महत्व और भी अधिक प्रमुख हो जाएगा.