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As contas magnéticas não são muito respeitadas no mundo do sequenciamento, mas são muito úteis.

Mas primeiro, como funcionam as contas magnéticas?

As próprias contas são esferas de poliestireno que foram revestidas com ferro para torná-las superparamagnéticas.
Este é apenas um termo sofisticado para "eles são muito atraídos por ímãs". E porque eles são atraídos por ímãs, torna-os a solução perfeita paraisolamento de biomoleculas de alta potência!

Estas contas de ferro podem ser funcionais de diferentes maneiras, por exemplo, podem ser revestidas para ligar proteínas, ou biotina, ou mesmo ácidos nucleicos. Isto.versatilidadeÉ o que os torna tão úteis para manipulação molecular!

Extração de ácido nucleico: As contas são funcionalizadas com grupos carboxílicos que lhes permitem ligar-se ao ácido nucleico precipitado do sal.Esta ligação é ajudada por um "agente de aglomeração" como o polietileno glicol (PEG) que força o DNA/ARN a se aproximar das contas.Este é basicamente o processo para qualquer um que queira fazer extração de ácido nucleico de alto rendimento.Ao contrário de placas ou colunas baseadas em filtros que cortam DNA/RNA, as contas podem produzir comprimentos de 60kb, o que é perfeito para aplicações de sequenciamento de leitura mais longas.

Selecção do tamanho do ADN: Mas esperem, há mais! Podem também usar estas contas de forma semelhante para fazer a selecção do tamanho do ADN.Fragmento inserir tamanho comprimento é importante para sequenciamento de leitura curta e dependendo do seu comprimento de leitura que você pode querer atirar para qualquer lugar entre 75bp a 400bp tamanhos de fragmentosHistoricamente, isso foi feito usando seleção de tamanho de gel ou sonorização, mas contas também podem ser usadas para selecionar faixas de tamanho de fragmentos ajustando a concentração do agente de aglomeração!Quanto mais agentes de aglomeração você incluirQuanto mais pequenos forem os fragmentos que reter.

Normalização do ácido nucleico: Alternativamente, as próprias contas têm uma capacidade de ligação específica com base no seu tamanho, concentração de sal e proporção de PEG.Estas contas podem ser usadas para ligar uma quantidade específica de ácido nucleico para aplicações a jusante sem ter que se preocupar em quantificar a quantidade que há antes de passar para o próximo passo!

Captura de alvo: As contas podem ser revestidas com streptavidina, que é uma proteína que se liga muito fortemente à biotina.As sondas de ácido nucleico 5' rotuladas com biotina são incubadas com uma amostra de DNA para se ligar aos seus alvos, expostos a grânulos magnéticos revestidos com estreptavidina e, em seguida, lavados para isolar o alvo capturado da amostra em massa.

Imunoprecipitação: Outra grande palavra, mas significa apenas 'usar um anticorpo para isolar algo!' As contas magnéticas podem ser funcionalizadas para ligar anticorpos.Estes podem então magneticamente isolar células específicas de uma amostra, proteínas ligadas a fragmentos de DNA, ou pescar qualquer interação de afinidade que desejar.

Respeita o poder da conta!