خرز مغناطيسي Oligo dT لتنقية mRNA

استخلاص الحمض النووي الريبوزي المرسال (mRNA) باستخدام خرزات مغناطيسية Oligo dT وتنقيته

ملخص مقدمة

خرزات Oligo dT المغناطيسية هي جسيمات مغناطيسية دقيقة مغلفة تساهميًا بسلاسل oligodeoxythymine على سطحها. يعتمد مبدأها الأساسي على قاعدة الاقتران التكميلي، حيث تتشابك سلاسل Oligo dT وترتبط بشكل خاص بذيل PolyA، وهي سمة مميزة في نهاية 3' للحمض النووي الريبوزي المرسال حقيقي النواة (mRNA)، مما يتيح الفصل السريع وعالي النقاء للحمض النووي الريبوزي المرسال من الحمض النووي الريبوزي الكلي.ببساطة، تعمل خرزات Oligo dT المغناطيسية كـ "مشط مغناطيسي متخصص"، حيث تقوم "باستخلاص" الحمض النووي الريبوزي المرسال الذي يحتوي على ذيل PolyA بدقة من خليط الحمض النووي الريبوزي.ميزات المنتجخصوصية عالية: ترتبط بشكل خاص بالحمض النووي الريبوزي الذي يحتوي على ذيل PolyA، وخاصة الحمض النووي الريبوزي المرسال، مما يزيل بفعالية التداخل من الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي (rRNA) والحمض النووي الريبوزي الناقل (tRNA) (التي تشكل أكثر من 95٪ من الحمض النووي الريبوزي الكلي).

نقاء وسلامة عالية:

التفاعلات الكيميائية اللطيفة وطرق الغسيل غير الكحولية تحافظ بشكل أفضل على سلامة ونقاء الحمض النووي الريبوزي المرسال، مما يجعله مناسبًا للتطبيقات اللاحقة التي تتطلب جودة حمض نووي ريبوزي عالية جدًا.

عملية سريعة وبسيطة: يمكن إكمال العملية بأكملها في غضون 30-60 دقيقة، وهي أسرع بكثير من طريقة كروماتوغرافيا عمود سليلوز oligo dT التقليدية، ولا تتطلب طردًا مركزيًا.

توافق مع الإنتاجية العالية: يمكن أتمتتها بسهولة، ومتوافقة مع تنسيقات الأطباق ذات 96 بئرًا، وتلبي متطلبات التطبيقات عالية الإنتاجية مثل التسلسل.

حساسية عالية: مناسبة لعزل الحمض النووي الريبوزي المرسال من العينات النزرة (مثل عدد قليل من الخلايا، عينات تم التقاطها بالليزر، أقسام FFPE).

آمن وصديق للبيئة: تتجنب استخدام الكواشف السامة مثل الفينول والكلوروفورم.

مجالات التطبيق الرئيسيةتعتبر خرزات Oligo dT المغناطيسية أداة أساسية في جميع المجالات تقريبًا التي تتضمن أبحاث الحمض النووي الريبوزي المرسال.

تسلسل الجيل التالي (NGS)RNA-Seq:

هذا هو التطبيق الأساسي. إثراء الحمض النووي الريبوزي المرسال باستخدام خرزات Oligo dT المغناطيسية لبناء مكتبة التسلسل يسمح بتحليل مستويات التعبير الجيني، واكتشاف النسخ الجديدة، والكشف عن التوصيل البديل. بالنسبة لحقيقيات النواة، هذه هي الطريقة الأكثر شيوعًا لإعداد مكتبة الحمض النووي الريبوزي المرسال.

تسلسل الحمض النووي الريبوزي الخلوي الفردي (scRNA-seq):

على مستوى الخلية الفردية، تعتبر خرزات Oligo dT المغناطيسية مفتاحًا لالتقاط الحمض النووي الريبوزي المرسال المنطلق بعد تحلل الخلية.

بناء مكتبة الحمض النووي المكمل (cDNA) والاستنساخيُستخدم الحمض النووي الريبوزي المرسال المنقى كقالب لتخليق الشريط الأول من الحمض النووي المكمل، والذي يُستخدم لبناء مكتبات الحمض النووي المكمل، واستنساخ الجينات، والدراسات الوظيفية.

تحليل التعبير الجينيRT-qPCR:

إثراء الحمض النووي الريبوزي المرسال متبوعًا بالنسخ العكسي والتفاعل البوليميرازي الكمي ينتج بيانات تعبير جيني أكثر دقة وحساسية عن طريق إزالة ضوضاء الخلفية غير الحمض النووي الريبوزي المرسال.

Northern Blot:

يتطلب حمضًا نوويًا ريبوزيًا مرسالًا عالي النقاء كجزيء مستهدف للاستكشاف.

الترجمة في المختبر (In Vitro Translation)تُستخدم في أنظمة التعبير البروتيني الخالي من الخلايا، حيث يعمل الحمض النووي الريبوزي المرسال المنقى مباشرة كقالب لتخليق البروتين المستهدف.

أبحاث الأمراض والتشخيصاكتشاف المؤشرات الحيوية:

عزل الحمض النووي الريبوزي المرسال من العينات السريرية (مثل الدم، أنسجة الورم) للبحث عن بصمات التعبير الجيني المرتبطة بالأمراض.

الكشف عن مسببات الأمراض:

تمتلك بعض الحمض النووي الريبوزي الفيروسي أيضًا ذيول PolyA ويمكن إثراؤها باستخدام خرزات Oligo dT المغناطيسية للكشف عنها.

معلومات تقنيةMag Oligo dT

رقم القطعةNBT501

حجم الجسيمات